梅毒螺旋体一旦感染人体,人体迅速对被损害的宿主细胞以及梅毒螺旋体细胞表面所释放的类脂物质作出免疫应答,在3~4周时产生抗类脂抗原的抗体(反应素)。这些抗体主要是IgG和IgM型混合抗体。非梅毒螺旋体抗原试验是用心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原的絮状凝集试验。反应素与心磷脂形成抗原抗体反应,卵磷脂可加强心磷脂的抗原性,胆固醇可增强抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂遇水形成胶体溶液,胆固醇遇水形成结晶。当抗原与抗体混合发生反应时,后者即黏附胶体微粒的周围,形成疏水性薄膜。由于摇动、碰撞,使颗粒与颗粒互相黏附而形成肉眼可见的颗粒凝集和沉淀,即为阳性反应。如遇到非梅毒血清,因体液中的白蛋白多于球蛋白,而白蛋白对胶体颗粒有保护作用,形成亲水性薄膜,即使同样摇动、碰撞,由于抗原颗粒周围没有黏附免疫球蛋白的作用,不能形成较大颗粒,无肉眼可见的凝集和沉淀,因此为阴性反应。
非梅毒螺旋体抗原血清试验如何操作,结果如何解读
1.性病研究实验室(VDRL)玻片试验
【定性试验】
(1)血清标本需56℃灭活30分钟备用。
(2)吸取0.05毫升血清放入玻片圈内,将血清涂开至整个圈内。
(3)用标准针头加入1滴VDRL抗原。
(4)将玻片置旋转器上摇动4分钟,180±5础分钟,立即置10×10倍显微镜下观察。
结果:
大或中等大小的絮状物,液体清亮:3+~4+强阳性反应;
絮状物较小,液体较清亮: 2+ 阳性反应;
絮状物较小,均匀分布,液体混浊1+ 弱阳性反应;
抗原颗粒稍粗,无凝集 ± 司疑;
抗原颗粒均匀,针状细小: 一 阴性反应。
【定量试验】
经vDRL定性试验为阳性、弱阳性,可疑反应或阴性但临床怀疑为梅毒者,需做定量试验,前者需明确抗体滴度,后者为排除“前带现象”。
(1)在反应板l~8孔各加等渗盐水O.05毫升。
(2)吸取O.05毫升血清标本(血清已灭活)置第1孔与等渗盐水混匀,吸取0.05毫升稀释液至第2孔混匀,再吸取O.05毫升至第3孔,如此连续稀释至第8孔,弃0.05毫升稀释液。稀释度为原倍、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、l:64、1:128,必要时可稀释至更高倍数。
(3)每个稀释度加入抗原1滴。
(4)旋转速度和时间同定性试验。
2.快速血浆反应素(RPR)环状卡片试验
RPR试验是VDRL试验的一种改良方法。该法是在抗原中加人活性炭颗粒作为指示物,特制的白色纸卡替代了玻片。试验结果易于判断,肉眼即可观察,血清不需灭活,也可用血浆进行检钡4,试验结果可保存。抗原放4℃冰箱可保存
1年。
【定性试验】
(1)吸取O.05毫升血清或血浆加于卡片圈内,并均匀地
涂布在整个圈内(每张纸卡有10个或12个反应圈)。
(2)将抗原轻轻摇匀,用标准针头吸取抗原,每个标本
加1滴抗原。
(3)将卡片置水平旋转器旋转8分钟,100±5转/分钟。
(4)立即在明亮光线下观察结果。
结果:
中到大的黑色絮状物,液体清亮 3+~4+强阳性
小到中的黑色絮状物,液体较清亮2+ 阳性
小的黑色絮状物,液体混浊 1+ 弱阳性
仅见活性炭颗粒集于中央一点 一 阴性
或均匀分散
【定量试验】
RPR定量试验的指证与VDRL试验相同。
(1)在圈内加入O.05毫升等渗盐水(一般作6~8个稀释度),勿将盐水涂开。
(2)吸取0.05毫升血清或血浆作系列稀释(1:2~1:64),当稀释到最后的第6孔时,弃去O.05毫升稀释液。从第6孔起将血清稀释液涂布整个圈内,再涂布第5孔,依此向前到第1孔。
(3)滴加抗原,旋转时间、速度和观察结果同定性试验。
3.甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)
TRUST试验原理与RPR试验原理相同。唯TRUST试验的抗原中加入甲苯胺红颗粒代替活性炭颗粒指示物,使阳性结果出现红色絮状现象,阴性结果见红色颗粒集于中央或均匀分散。
TRusT试验方法及结果判断均与RPR试验相同。